尼康顯微鏡激發塊HYQ套裝

尼康HYQ熒光濾波器組合組包括四個小心平衡高性能集，所有這些并入帶通發射（阻擋）濾光片的熒光的一個有限的波長范圍內的選擇性隔離。 命名為每個HYQ濾波器集合反映了它被設計主要的熒光染料的名稱，但其各自的激發范圍內，每一種組合可以應用于各種適宜的熒光染料。

兩個HYQ熒光過濾器集傳輸綠激發光（TRITC HYQ和Cy3 HYQ），而一個提供黃色區域的激發（ Texas Red HYQ），一個是專為橙紅色的激發（Cy5 HYQ）。 HYQ濾光片組合的典型特征是更廣泛的帶通激發和發射濾波器，比起許多標準集，以便提供增加的能量傳輸和增強熒光信號電平。 作為一個群體，在HYQ過濾器組合提供的光譜范圍，包括激發波長從530納米（綠色）至650納米（紅色），和排放檢測，從573納米（黃色），以738納米（紅外線）的范圍。激發濾光器的通帶是30，55，或60納米的寬度，并且被組合為60或75納米的發射濾波器的通帶。

各個HYQ過濾器集的性能可以通過檢查標本選擇的圖像標記與具有相匹配的通帶和切割在過濾器上的組合的波長，如示于圖1中的有袋動物（大鼠袋鼠光譜曲線的熒光團進行判斷; PTK2細胞系在圖1中給出）細胞角蛋白中間纖維網（a）的免疫熒光染色與偶聯于Cy3的抗細胞角蛋白抗體，而在圖1（b）的線粒體（印度麂皮鹿皮成纖維細胞）的標記MitoTracker紅CMXRos。 同樣地，從肌動蛋白絲的網絡（印度麂）熒光在圖1（c）示出從將Alexa Fluor 568綴合鬼筆環肽起源。 所有這些探針都在與Nikon HYQ過濾器集組合是有用的。 在深紅色熒光發光區域，將Alexa Fluor 647進行良好（在圖1的HeLa細胞的細胞核（D））與Cy5的HYQ濾波器組合的組合。

HYQ濾波器集合的高性能設計的功能包括實現更寬濾波器的通帶，同時保持高信噪比，與信號頻帶之間的最小交叉（光譜bleedthrough）。 這些目標是通過使用過濾器制造技術，包含在兩個激發和發射濾光片更大數目干涉腔，以產生很陡的切口上，并切斷過渡在過濾器傳輸曲線來實現。 反射和透射的波長范圍之間的這些尖銳的邊界允許通帶附近的精確定位，以彼此從信號交叉的小的性能下降。 其結果是，以提供最高的激發效率和最大熒光檢測，同時保持信號的分離在幾個熒光團時，他們被組合在多個標簽的技術。

設計用于綠色波長激發兩個HYQ過濾套，TRITC HYQ和Cy3的HYQ，采用相同的帶通濾波器激發（530至560納米）和二色鏡（570納米截止波長）。 兩個檢測熒光的橙色?紅色光譜區域，但不同之處在于所述Cy3 HYQ發射濾波器的通帶更寬的進一步延伸向低波長的光，在黃色區域中。 在Cy3 HYQ組合的75納米發射通帶范圍從573到648納米; 在TRITC HYQ設置限制排放量，以590至650納米的更窄60納米范圍內。

對熒光團在較長的波長比由所述兩個綠色激HYQ組合提供的激發，在Texas RedHYQ濾波器集合包含一個激發濾光器帶通帶從綠色至黃色區域延伸（532至587納米）到下部橙色的波長。 一個595納米的二色鏡的組合截止波長和從橙色延伸到遠紅（608至683納米）發射濾波器的通帶可容納一寬范圍的熒光染料的，除了Texas Red。 該過濾器的組合是相似于Y-2E / C黃色激發組，具有更廣泛的激發和發射帶通窗，允許它傳送更多的能量，并產生相對亮的圖像。 55的寬的傳輸通帶和75納米的激發和發射濾波器，分別與銳截止通和截止的轉換導致更高的性能表征濾波器集合與HYQ指定。

所述Cy5 HYQ濾波器集合是最長波長HYQ組合，并提供了寬60納米的激發頻帶跨越整個橙光譜區并延伸到紅色（590至650納米）。 熒光發射檢測是可能的，從深沖的波長的75納米的頻帶化為無形近紅外區域內，并且在許多應用中需要使用CCD或其他紅外敏感檢測器，用于充分利用。 所述Cy5 HYQ寬的通帶與尖銳躍遷為激發和發射濾波器，用于信號產生和檢測提供增加的能量，是典型在Nikon HYQ系列濾波器組合。 所述Cy5 HYQ集的發射通帶的中心在700納米，和從663至738納米的延伸。 低（切上）的波長被定位只有3納米以上660納米截止上長通雙色鏡。

• TRITC HYQ -綠色波長激發的過濾器組合是專為提高性能，熒光染料，如TRITC和DII。 相比典型地用于本申請中的一些綠色激發套，一加寬激發通帶和紅移二色鏡切口上向一個較高的信號電平，這些熒光團，并允許DsRed的熒光蛋白變體改進的檢測和遠紅色熒光HcRed蛋白質。

• Cy3 HYQ -綠色激發濾光片組合有類似的組件信息的G-2E / C組，盡管它產生通過擴大通帶窗戶增加激發和發射能量。 此外，發射通帶延伸到較低的波長（入黃），從而導致在那些既明亮和偏向橘黃色的色調的圖像。 這是用于檢測的花青熒光探針的Cy3，特別是在多標記技術，其中，它減少了從熒光團發射的遠紅和近紅外干擾所建議的過濾器的組合。

• Texas Red HYQ - 濾波器組合用于與熒光探針Texas Red和CY3.5使用進行了優化，具有更廣泛的激發和發射通帶比同類Y 2E / C組。 因為所得到的較高的信號電平，和發射通帶以波長更長的延伸，相對于在Y-2E / C組，該組合產生了在色調明亮，更偏紅的圖像。 Texas Red HYQ組合提供了用于探測發射于超出在Y-2E / C發射帶的上限波長改進的性能，同時限制從熒光團發射的深紅色和近紅外干擾。

• Cy5 HYQ -濾波器的組合是唯一的尼康組設計用于高能量紅色波長的激發，并且，雖然優化用于與熒光Cy5標記的使用，所述寬橙黃色到紅色激發范圍是適合于采用各種應用熒光染料。 在遠紅到近紅外波長熒光產生，相應于發射濾波器的通帶，在很大程度上是不可見的人的眼睛，而最有效的檢測需要使用的光電倍增管或CCD攝像機。 寬濾波器的帶通區域，結合陡峭截止點和截止轉換，保持最大的信號分離和信號 - 噪聲比，HYQ濾波器系列的特性。（奧林巴斯顯微鏡）

四個尼康HYQ濾光片組合使用激發波長為530納米（綠）至650納米（紅色）。 熒光團的寬陣列已經開發了使用的量，各個HYQ套被設計的綠色，黃色和紅色光譜區域內的激發波長的調查。 每個濾波器組頁面相關的激發波長類（綠色激發濾光片組為TRITC HYQ和Cy3的HYQ組合，黃色的激發套為Texas Red HYQ，紅色的激發集Cy5 HYQ）包括許多編目的表常用染料和熒光探針，和過濾器的組合，使他們能夠被可視化。 局部環境顯著影響熒光團的吸收光譜和發射光譜的最大值（峰值）波長的光，并且因此，在表中給出的值可能與實驗條件而變化。 列表僅意圖作為過濾器和熒光團的選擇的引導，而不應被認為是詳盡的或窮盡的匯編。許多包括在表中的熒光探針是專有的，已經開發了以最小化，同時確保了熒光染料的吸收和發射光譜，并共同熒光濾光片組合之間的最大的重疊光漂白。 注意，由于寬的吸收和發射帶，多個在各表中所列的熒光探針也適用于與其它激發波長區域濾光片組合使用。