微分干涉顯微鏡原理是什么?
歷史
1952年,Nomarski在相差顯微鏡原理的基礎上發明了微分干涉差顯微鏡(differential interference contrast microscope)。DIC顯微鏡又稱Nomarski相差顯微鏡(Nomarki contrast microscope),其優點是能顯示結構的三維立體投影影像。與相差顯微鏡相比,其標本可略厚一點,折射率差別更大,故影像的立體感更強。
技術設計
DIC顯微鏡的物理原理完全不同于相差顯微鏡,技術設計要復雜得多。DIC利用的是偏振光,有四個特殊的光學組件:偏振器(polarizer)、DIC棱鏡、DIC滑行器和檢偏器(analyzer)。偏振器直接裝在聚光系統的前面,使光線發生線性偏振。在聚光器中則安裝了石英Wollaston棱鏡,即DIC棱鏡,此棱鏡可將一束光分解成偏振方向不同的兩束光(x和y),二者成一小夾角。聚光器將兩束光調整成與顯微鏡光軸平行的方向。*初兩束光相位一致,在穿過標本相鄰的區域后,由于標本的厚度和折射率不同,引起了兩束光發生了光程差。在物鏡的后焦面處安裝了第二個Wollaston棱鏡,即DIC滑行器,它把兩束光波合并成一束。這時兩束光的偏振面(x和y)仍然存在。*后光束穿過第二個偏振裝置,即檢偏器。在光束形成目鏡DIC影像之前,檢偏器與偏光器的方向成直角。檢偏器將兩束垂直的光波組合成具有相同偏振面的兩束光,從而使二者發生干涉。x和y波的光程差決定著透光的多少。光程差值為0時,沒有光穿過檢偏器;光程差值等于波長一半時,穿過的光達到*大值。于是在灰色的背景上,標本結構呈現出亮暗差。為了使影像的反差達到*佳狀態,可通過調節DIC滑行器的縱行微調來改變光程差,光程差可改變影像的亮度。調節DIC滑行器可使標本的細微結構呈現出正或負的投影形象,通常是一側亮,而另一側暗,這便造成了標本的人為三維立體感,類似大理石上的浮雕。
優點
DIC顯微鏡使細胞的結構,特別是一些較大的細胞器,如核、線粒體等,立體感特別強,適合于顯微操作。目前像基因注入、核移植、轉基因等的顯微操作常在這種顯微鏡下進行。
微分干涉顯微鏡原理
當兩束光通過光學系統時會發生相互干涉,如果相位相同,干涉的結果是亮度增強,反之,就會相互抵消變暗,這就是光波的干涉現象。
微分干涉顯微鏡是以平面偏振光為光源,光線經棱鏡折射后分成兩束,在不同時間經過樣品的相鄰部位,然后經過另一棱鏡將這兩束光匯合,從而樣品中厚度上的微小差別就會轉化成明暗區別,增加了樣品反差,造成了標本的人為三維立體感,類似大理石上的浮雕。
微分干涉顯微鏡適于研究活細胞中較大的細胞器,如果接上錄像裝置可以記錄活細胞中的顆粒以及細胞器的運動。
維護與保養
1微分干涉顯微鏡透鏡的清潔
*好用吹風球或者柔軟
更多的校頑固的污跡如
不要用二甲苯清洗雙目
純酒精和二甲苯均易燃燒,在將電源開關或關閉時特別要當心著火。
2 微分干涉顯微鏡油漆或塑料表面的清潔
在清潔產品油漆面、塑料件時要使用規定的布料,如果有較頑固的污跡,用濕紗布澆一點無害的清潔劑輕輕的擦試污點。
避免使用有機易溶劑(譬如酒精、******、或油漆稀釋劑)擦拭儀器的油漆表面,這樣會導致部分變形和文字脫落,我們建議使用軟性清潔劑清洗。
塑料表面只能用軟布澆上清水來清潔
3 當顯微鏡不使用時
當顯微鏡不使用時,請用塑料罩蓋好,并儲放在干燥的地方免生霉
我們特別建議將物鏡和目鏡保存在干燥器一類的容器中,并放干燥劑。
4 微分干涉顯微鏡需防潮、防異物
不要將顯微鏡放在潮濕的埸所,如果水落在顯微鏡上,立即關閉電源開關,待處理完并確認干燥后再使用。
5微分干涉顯微鏡定期檢查:為保持顯微鏡的性能,建議進行定期檢查。