樣品制備包含三個步驟:首先,標本的小水滴懸浮在一個緩沖區包含30%甘油和乙酸銨緩沖噴灑到新鮮貼近,干凈的云母片表面。 第二步,樣品轉移到高真空蒸發器:這個工具允許存款薄層的電子致密物質(通常是Pt、W或非盟)在低角度到樣品。 蒸發物質積累主要在提高樣本,從而提供了對比。 隨后,一層支持C是蒸發到標本提供支持。 在第三步中,副本形成脫離的云母和安裝到EM電網教具電子顯微鏡檢查。

徠卡EM ACE600配備Pt / C和C電子束蒸發,第二步可以完全自動化:從樣本已經轉移到收件人的高真空蒸發器,直到程序結束,儀器充分控制真空,標本的位置相對于金屬/碳源和沉積材料的厚度。

兩個電子***支使用在這個準備的過程中,這兩個需要脫氣,以避免相當退化的真空由于加熱在當下的實際蒸發開始。 而不是兩個后續德加/泵/蒸發周期Pt / C和C,它是首選先德加兩***,然后泵需要相當長的時間來達到一個好的過程真空蒸發材料。 一個自動序列正在這里描述實現該方法。 Pt / C***安裝在正確的端口,C***在左邊。

• 材料使用Pt標準定義的“白金德加”設置,50 W脫氣的力量,和120秒脫氣。

• 材料使用C標準設置“碳德加”的定義,75 W脫氣的力量,和300秒脫氣。

• 兩種材料“鉑沒有德加”和“碳不德”具有相同的屬性定義為原始材料,但脫氣是停用。

• 過程“脫氣Pt / C”旨在德加Pt / C***只是編程使用的材料“白金德加”。 這一過程將開始為1.0×10 4 mbar,蒸發低30 W的力量,和目標厚度為0.0 nm打開快門后立即終止。 設置階段地位因此過時了。

• 脫氣過程”C”旨在德加C***只是編程使用材料“碳德加”。 這一過程將開始為1.0×10 4 mbar,蒸發低30 W的力量,和目標厚度為0.0 nm打開快門后立即終止。 設置階段地位因此過時了。

• 過程“陰影Pt / C”程序使用以下設置:材料“鉑不德”,功率100 W目標,目標厚度2.0 nm,真空< 2.5×10 5 mbar、舞臺在-54°傾斜(對應于5°相對于***),最大工作距離,旋轉5(最大值)。

• “支持度”是編程過程使用以下設置:材料“碳無德”,120 W targat力量,目標厚度6.0 nm,真空< 2.5×10 5 mbar,舞臺上20°傾斜(相對于水平),最大工作距離,旋轉5(最大值)。

• 一個序列組成的“脫氣Pt / C”,“脫氣C”,“陰影Pt / C”,“支持度”準備。

在實驗之前,Pt / C和C***清洗徹底,細絲的目標和建立根據手冊。 Pt / C***是安裝在真空室的正確的端口,C***在左邊。 佬司的儀器成立(低角度旋轉跟蹤)階段和石英晶體在側臥位。

130μg /毫升dsDNA長度1010完全(對應343海里)在噴灑稀釋1:20緩沖區(100中毒/ l醋酸銨,30%的甘油,pH值7.6)。 小水滴噴灑噴霧裝置中描述到新開辟的云母片表面大約2×2毫米大小和安裝與雙面膠帶在50毫米圓形濾紙。

噴灑后,對濾紙樣品立即轉移到隨時準備徠卡EM ACE600和疏散。 上面列出的順序與被處決,商會是在完成時自動排放。

濾紙上的副本被從真空室和轉移到潮濕的cham-ber,制成的塑料盤子,封口膜(使樣本變濕),和濕濾紙。 促進超然的復制品,他們孵化在烤箱45°C 30分鐘。

隨后,副本是浮在表面的蒸餾水在一個白盤子里,挑了一個un-filmed 400目銅網格,ddH轉移到另一個盤 2 O所有殘余有機物的去除(甘油),拿起另一個網格。 多余的水從側面涂抹和技巧的濾紙的鉗,樣本被風干。

空氣干燥的副本在透射電子顯微鏡下觀察到在80千伏,感興趣的區域可以通過晶體的殘留鹽形成的中心干水滴中描述。 圖像記錄用CCD相機的像素大小0.373 nm /像素。