除了 在去除不需要的自發熒光，可以在許多標本掩蓋細節的效用，光譜成像也是分離的動態熒光共振能量轉移熒光蛋白和其他熒光團的重疊發射光譜的顯著優點（FRET）的實驗中，這往往是復雜通過為極其快速的圖像捕捉的要求。 這種互動式教學探討修改包含融合青色，而在接受時除了鈣共振能量轉移的變化黃色熒光蛋白焦躁生物傳感器的光譜分布。

本教程初始化與鈣的生物傳感器（YC3.6）被呈現在圖中左側的窗口450至600納米的光譜曲線。 熒光蛋白生物傳感器的卡通插圖出現在圖的右側，綠色鈣離子下方。 青色熒光蛋白（ECFP）由青色桶表示與黃色熒光蛋白（EYFP）是由當FRET發生黃色桶表示（它是否則灰色）。 從連續的10納米波段組成一個lambda堆棧的圖像呈現在主窗口下方。 為了操作的教程，使用FRET進度滑塊來增加鈣離子濃度，并喚起了結構轉變，產生FRET的生物傳感器。注意在lambda棧波段作為FRET的程度增加變化到細胞核的強度。

在FRET顯微鏡遇到的復雜的信號被認為是為了進行共振能量轉移所必需的熒光基團的過量光譜重疊的混淆。 因此，除了光譜成像，以在多色固定和活細胞中分離熒光光譜的能力，該技術是**地適于解開發射捐款在FRET成像供體和受體熒光團。 配備多陽極探測器現代高性能共聚焦顯微鏡特別適用于FRET分析，由于其高率圖像捕獲，調查熒光蛋白的生物傳感器是在毫秒級操作時，這是經常需要的。 與32通道多陽極探測器，光譜成像共焦顯微鏡可以在一次掃描中兩種熒光FRET收購整個光譜響應。 然而，即使光譜成像能夠在FRET同時檢測這兩種熒光團的發射信號，該技術是無法通過能量轉移和信號源于直接激發產生的受體發射之間進行區分。 因此，使用分別表示供體和受體的蛋白質適當的控制是必要的定量分析。 在光譜成像是用來評估FRET中表達為單個多肽熒光蛋白的生物傳感器的情況下，控制是不太重要的。