奧林巴斯顯微鏡:光源的種類及波長
在大多數熒光顯微鏡應用,到達眼睛或其它檢測器,諸如視頻相機或光電倍增管的光子的數目,通常是非常低的。 這是因為大多數的熒光量子產率是低的(量子產率的試樣所發出的量子數的比率相比,吸收的量子數)。 為了產生足夠的激勵光強度提交排放可檢測的,需要**的光源,通常弧(燈)]是表示在圖1的例子相似的燈。 這些燈都充滿了高壓氣體,應謹慎處理。
*常見的燈是汞燈,功率從50瓦到200瓦,而氙氣燈,從75瓦到150瓦不等。 在圖1中的汞燈燈泡由兩個電極密封在高壓下在石英玻璃外殼,其中也包含汞的。
這些光源通常是由直流電源提供足夠的啟動電源點燃的燃燒器(由電離的氣態蒸氣),并保持它閃爍*低燃燒供電。 電源應該有一個定時器,使燃燒器一直在使用的小時數來跟蹤。 弧光燈,失去效率和更容易碎裂,如果使用*出其額定壽命。 的汞燃燒器不提供甚至在整個頻譜強度從紫外到紅外(汞燃燒器的發射光譜的,請參閱圖2)。 汞燃燒器的強度的大部分被消耗在近紫外線,峰的強度,在313,334,365,406,435,546,和578納米。 在其他波長的可見光,其強度是穩定的,但幾乎沒有那么明亮,但仍可使用的藍光激發。它也應該明白,單純的功率是不是*的考慮,確定亮度。
熒光燈規格
燈 | XBO | XBO | HBO | HBO | HBO |
當前 | DC | DC | DC | DC | DC |
額定功率(W) | 150 | 75 | 200 | 100 | 50 |
光通量(流明) | 3000 | 950 | 10000 | 2200 | 1300 |
光強度(Candella) | 300 | 100 | 1000 | 260 | 150 |
平均。 亮度(cd/cm) | 15000 | 40000 | 40000 | 170000 | 90000 |
圓弧尺寸 | 0.50×2.20 | 0.25×0.50 | 0.60×2.20 | 0.25×0.25 | 0.20×1.35 |
壽命(小時) | 1200 | 400 | 400 | 200 | 200 |
表1
另外一個重要的標準是圓弧的大小;包含的每單位面積的亮度的圓弧內的目標的背面孔徑是一個更好的措施的有用的燃燒器的亮度。 使用的標準,你會注意到,表1中列出的三種汞燃燒器,在100瓦的燃燒器(在其他條件相同)的三個是*亮的。 的燃燒器在您的選擇也很重要的是是否匹配的燃燒器的波長的光譜強度峰值的熒光染料染色的標本的激勵要求。 每當被評估的照明系統,它是要考慮整個系統,包括聚集器透鏡和光圈和視場光闌的使用固定科勒照明。
做的汞的燃燒器(參見圖3)相比,在整個可見光譜的氙氣的燃燒器具有更均勻的強度,它們不具有非常高的光譜強度峰值,是汞的燃燒器的特征。 氙氣燈有缺陷中的紫外線;他們花費相當大的比重,它們的強度在幀內紅色,因此,使用這種燈需要小心控制熱量。 短隙氙氣燃燒器通常是更可取的,因為該圓弧的大小是這樣的,它的光可以更容易地包括光圈的物鏡內的背面,從而避免浪費的光強度。
注意! |
汞和氙弧燈的操作期間,因為爆炸的危險性,由于非常高的內部的氣體壓力和極端的在使用過程中產生的熱,需要謹慎。 不要點燃一盞燈外,其外殼或直接觀察燈,當它燃燒(這可能對眼睛造成嚴重傷害)。 對于汞及氙燈應處理用裸露的手指為了避免無意中蝕刻的石英的信封。 更換燈泡燈泡后,有足夠的時間冷卻。 在他們的集裝箱儲存燈,以免發生意外。 |
始終堅持以安裝或更換汞或氙弧燈時,上面列出的安全程序。
汞燃燒器有200個小時的生命;氙氣燃燒器幾百小時。 頻繁通斷開關可降低燈泡的使用壽命。 當燃燒器達到額定壽命,頻譜輻射可能會改變,石英外殼減弱。
有時,鎢鹵燈的使用,尤其是藍色或綠色的激發與明亮的發光標本。 它們的輸出是相對均勻,在整個可見光譜(圖4),它們是缺乏的近紫外光,也具有相對高的比例在紅外線強度。 這些燈并不需要昂貴的電源供應器的點火,但都采用低電壓互感器,持續30到50小時的燈泡使用時,在其*大額定電壓。
近年來,出現了越來越多地使用的激光器 ,特別是氬離子激光具有**的發射能力在488和514納米。 盡管成本高,已成為激光光源,在激光掃描共聚焦顯微鏡特別有用。 有許多不同類型的激光器,每個提供一個**的發射光譜。 圖5示出的兩個*常用的激光器,在熒光顯微鏡下的發光光譜。
有許多不同的設備,此技術已被證明是一個**的工具,提供非常尖銳的熒光圖像,通過巧妙地控制了焦光。 這是通過掃描和成像非常小,淺水區先后。 的試樣的光學部分被存儲在一臺計算機中,并重新恢復成整個圖像然后可以顯示在視頻監視器上,或印有一個視頻打印機。
燈管對齊 - 顯微鏡公司可能會提供一個可選的定心屏幕,以方便的定心的燈弧的圖像的物鏡的背面孔徑。此附件,在其上端,標準的皇家顯微學會(RMS)線程和可以擰入物鏡轉換器。 它被放在那里,入光路旋轉。 附件的下表面具有磨砂處理,與內切十字橙色玻璃。
灌進從分色鏡的光撞擊內置的定心屏幕反射,被反射到的十字準線,如在圖6中示出。 當你操縱的燈的聚光鏡旋鈕和定心的燈座上的螺絲,你可以移動的圖像,使其為中心的十字線(圖7(a))。 可制成更大或更小的大小的圖像的圓弧通過操縱燈聚光鏡桿。 當您完成定心配件,它可以被替換由定期的目的。 如果燈箱包含一個反射鏡,反射鏡的位置被調整,使得在鏡子電弧圖像電弧圖像本身平行且相鄰地定位,如在圖7(b)所示。
如果你沒有定心屏幕,按照下面的方法可以使用。 聚焦標本與10倍的物鏡。 然后旋轉物鏡轉盤顯微鏡的光路中,將一個空的開口上物鏡轉盤。 將白色卡在載物臺上(到位的標本),你會看到的形象投射到卡的弧。 通過操縱燈聚光鏡旋鈕和燈箱上的定心螺釘的燃燒器,可以在中心的圖像的弧的顯微鏡的光軸。