尼康顯微鏡相差和DIC顯微鏡的比較
微分干涉對比(DIC)和相差顯微鏡之間*根本的區別是在其上的圖像是由互補的技術形成的光學基礎。標本由這些對比增強方法研究產生往往是完全不同的外觀和性格時,客觀地比較圖像。這種互動式教程探討很多相襯和DIC顯微鏡拍攝的圖像之間表現出的異同。
本教程初始化一個隨機選擇的樣本出現的標本圖像窗口和對比度機制滑塊也設置為一個隨機位置。為了操作的教程,使用鼠標光標移動到翻譯對比度機制的滑塊之間的相位對比圖像(滑塊移到*左邊)和DIC圖像(滑塊移到*右邊)位置。當滑塊從一個對比度機構移動到另一個時,該圖像改變字符并開始獲取新的對比機制的屬性。不同的樣品可以從調色板中使用的選擇中選擇一個標本下拉菜單。
相差顯微鏡產生的圖像強度(振幅),該變化作為試樣的光程長度數量級的函數值,具有非常密集的區域(那些具有大的路徑長度)出現比背景暗。可替換地,試件具有相對低的厚度值的功能,或折射率小于周圍介質,在標準(正)相造影劑的灰色背景重疊時,呈現輕得多。
這種情況是相當不同的對微分干涉對比,其中的光路長度的梯度(在效果上的變化的波陣面的方向的速度剪切)主要負責對比度。在路徑長度陡梯度產生優異的對比度,和圖像顯示的偽三維浮雕陰影,這是DIC的技術特性。具有很淺的光路的斜坡,如那些在延長,扁平的樣品觀察到的區域,產生微不足道的對比度,經常在相同強度水平作為背景出現在圖像中。
除了在對比的形成機制的差異,DIC和相襯圖像的不同之處的一些其它特征。圖1所示是在比較中DIC和相襯捕獲標本幾個數字圖像。一個人類口腔上皮細胞暴露于在DIC的上表面上的核和眾多的細菌是在圖1(a)所示,與相同的視場與圖1中相位對比(b)所示。相襯圖像設有蜂窩周和細胞核周圍明顯的暈圈,其不存在于所述的DIC圖像。光學切片的DIC調查(未示出)表明,該細菌是存在于該沐浴在周圍介質相對于躺在小區的下側的膜表面上。這一事實不能明確相襯確定。
在圖1(c)中,鼠腎組織成像,用DIC厚部分顯示的細胞封裝在細管的一個包。在同一地區的相襯圖像(圖1(d))的混亂及由相的暈圈的聚焦平面以外的存在的干擾。然而,一些蜂窩晶核出現的相位對比圖像,這是沒有區別的DIC中可見。相對的高放大視圖Obelia在DIC和相襯息肉稠干perisarc如圖圖1(e)示出了和圖1(f)所示,分別 在DIC時,(圖1(e))的環狀結構出現半球形內部的光線從干發出。另外,粒狀顆粒的莖結構中可見,但解剖細節在很大程度上是不確定的。相襯圖像(圖1(f))的是由周圍的圓環光暈和桿內混淆。
微分干涉對比*過相差的主要優點是,利用儀器滿數值孔徑沒有相位片或聚光器的環的掩蔽效應,這嚴重限制了聚光鏡和物鏡孔的尺寸的能力。主要優勢在于提高軸向分辨率,特別是相對于所述的DIC顯微鏡的大孔徑尺寸,以產生良好的高分辨率圖像的能力。